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保健食品中总三萜的测定（2020年版）
2022-03-31 11:54:34
1 范围
本方法规定了保健食品中总三萜的紫外-可见分光光度测定方法。
本方法适用于以含有三萜类成分为主要原料的保健食品中总三萜含量的测定。
2 原理
试样用氯仿或乙酸乙酯提取出的三萜类物质，在高氯酸的作用下与香草醛反应产生有色物质。以熊果酸为对照品，采用分光光度法测定总三萜在548nm波长下的吸光度进行定量。
3 试剂和材料
注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。
3.1 试剂
3.1.1 乙酸乙酯（CH3COOCH2CH3）。
3.1.2 氯仿（CHCl3）。
3.1.3 冰乙酸（CH3COOH）。
3.1.4 高氯酸（HClO4）。
3.1.5 香草醛（C8H8O3）。
3.2 标准品
熊果酸标准样品的分子式、相对分子量、CAS登录号见表1，纯度≥90%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
表1 熊果酸标准样品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量
3.3 标准溶液配制
熊果酸标准品溶液(100μg/mL)：精密称取熊果酸标准样品（3.2）10mg，至100mL容量瓶中，加乙酸乙酯（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀。
3.4 试剂配制
香草醛冰乙酸溶液（5%）：精密称取香草醛（3.1.5）0.5g，加冰乙酸（3.1.3）使溶解成10mL，即得。临用前配制。
4 仪器和设备
4.1 紫外-可见分光光度计。
4.2 分析天平：感量分别为0.01mg和0.0001g。
4.3 恒温水浴锅。
4.4 超声波清洗器。
4.5 离心机。
5 分析步骤
5.1试样制备
5.1.1 固体试样
取一定量混匀试样（软胶囊除外），精密称定（试样中总三萜的量约为0.5～5mg），置50mL量瓶中，加氯仿（3.1.2）约30mL，超声处理30min，放冷，加氯仿至刻度，摇匀。离心，取上清液备用。
5.1.2 油类制品
准确称取混匀试样适量（试样中总三萜的量约为0.5～5mg），置于100mL容量瓶中，用乙酸乙酯（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀。
5.1.3 软胶囊制品
取一定量混匀的净胶囊内容物，精密称定（试样中总三萜的量约为0.5～5mg），置于100mL容量瓶中，加乙酸乙酯（3.1.1）约60mL，超声处理30min，放冷，加乙酸乙酯至刻度，摇匀。
5.2 标准曲线的制作
分别精密吸取熊果酸标准品溶液（3.3）0.00、0.10、0.20、0.40、0.80、1.00mL于蒸发皿中，于60℃水浴上蒸干，冷却后精密加入0.4mL5%香草醛冰乙酸溶液（3.4），转动蒸发皿使残渣溶解，再精密加1.0mL高氯酸（3.1.4），混匀后移入10mL具塞比色管中，置60℃水浴加热15min，取出，冰浴冷却后，精密加入冰乙酸5.0mL摇匀，15min后以1cm比色池于548nm波长测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。
5.3 试样溶液的测定
精密量取试样上清液（5.1）1.0mL置蒸发皿中，于60℃水浴上蒸干。照标准曲线的制作（5.2）项下，自“冷却后精密加入0.4mL5%香草醛冰乙酸溶液……”起，同法操作，测定吸光度，根据标准曲线得到待测液中总三萜的浓度。
6 结果计算
试样中总三萜含量按下式计算:
式中：
Xi—试样中总三萜含量（以熊果酸计），单位为克每百克（g/100g）；
Ci—由标准曲线查得测定样液中总三萜质量，单位为微克（μg）；
m—试样的称样质量，单位为克（g）；
V1—试样定容总体积，单位为毫升（mL）；
V2—测定用试样体积，单位为毫升（mL）。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
本方法规定了保健食品中总三萜的紫外-可见分光光度测定方法。
本方法适用于以含有三萜类成分为主要原料的保健食品中总三萜含量的测定。
2 原理
试样用氯仿或乙酸乙酯提取出的三萜类物质，在高氯酸的作用下与香草醛反应产生有色物质。以熊果酸为对照品，采用分光光度法测定总三萜在548nm波长下的吸光度进行定量。
3 试剂和材料
注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。
3.1 试剂
3.1.1 乙酸乙酯（CH3COOCH2CH3）。
3.1.2 氯仿（CHCl3）。
3.1.3 冰乙酸（CH3COOH）。
3.1.4 高氯酸（HClO4）。
3.1.5 香草醛（C8H8O3）。
3.2 标准品
熊果酸标准样品的分子式、相对分子量、CAS登录号见表1，纯度≥90%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
表1 熊果酸标准样品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量
| 中文名称 | 英文名称 | CAS登录号 | 分子式 | 相对分子量 |
| 熊果酸 | Ursolic Acid | 77-52-1 | C30H48O3 | 456.68 |
熊果酸标准品溶液(100μg/mL)：精密称取熊果酸标准样品（3.2）10mg，至100mL容量瓶中，加乙酸乙酯（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀。
3.4 试剂配制
香草醛冰乙酸溶液（5%）：精密称取香草醛（3.1.5）0.5g，加冰乙酸（3.1.3）使溶解成10mL，即得。临用前配制。
4 仪器和设备
4.1 紫外-可见分光光度计。
4.2 分析天平：感量分别为0.01mg和0.0001g。
4.3 恒温水浴锅。
4.4 超声波清洗器。
4.5 离心机。
5 分析步骤
5.1试样制备
5.1.1 固体试样
取一定量混匀试样（软胶囊除外），精密称定（试样中总三萜的量约为0.5～5mg），置50mL量瓶中，加氯仿（3.1.2）约30mL，超声处理30min，放冷，加氯仿至刻度，摇匀。离心，取上清液备用。
5.1.2 油类制品
准确称取混匀试样适量（试样中总三萜的量约为0.5～5mg），置于100mL容量瓶中，用乙酸乙酯（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀。
5.1.3 软胶囊制品
取一定量混匀的净胶囊内容物，精密称定（试样中总三萜的量约为0.5～5mg），置于100mL容量瓶中，加乙酸乙酯（3.1.1）约60mL，超声处理30min，放冷，加乙酸乙酯至刻度，摇匀。
5.2 标准曲线的制作
分别精密吸取熊果酸标准品溶液（3.3）0.00、0.10、0.20、0.40、0.80、1.00mL于蒸发皿中，于60℃水浴上蒸干，冷却后精密加入0.4mL5%香草醛冰乙酸溶液（3.4），转动蒸发皿使残渣溶解，再精密加1.0mL高氯酸（3.1.4），混匀后移入10mL具塞比色管中，置60℃水浴加热15min，取出，冰浴冷却后，精密加入冰乙酸5.0mL摇匀，15min后以1cm比色池于548nm波长测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。
5.3 试样溶液的测定
精密量取试样上清液（5.1）1.0mL置蒸发皿中，于60℃水浴上蒸干。照标准曲线的制作（5.2）项下，自“冷却后精密加入0.4mL5%香草醛冰乙酸溶液……”起，同法操作，测定吸光度，根据标准曲线得到待测液中总三萜的浓度。
6 结果计算
试样中总三萜含量按下式计算:
式中：
Xi—试样中总三萜含量（以熊果酸计），单位为克每百克（g/100g）；
Ci—由标准曲线查得测定样液中总三萜质量，单位为微克（μg）；
m—试样的称样质量，单位为克（g）；
V1—试样定容总体积，单位为毫升（mL）；
V2—测定用试样体积，单位为毫升（mL）。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
